경희대학교 식물기능유전체학 실험실

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2004-04-02 22:51:09 | Hit : 9962 | Vote : 2698

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유전공학2 질문 답변 2004/04/02

오늘 수업시간에 질문이 있었는데 설명을 못해서 대신합니다. 혹시 메일을 보지 않는 사람을 위해서 프린트하여 주위의 친구에게도 알려주기 바랍니다. 그리고 아래 질문한 학생에게: 질문 고맙습니다.

안녕하세요?
유전공학2 수업을 듣는 학생인데 공부하던 중 의문점이 생겨 질문드립니다.

1. T-dna tagging에서 양쪽 border 내부에 존재하는 op, cy, au를 담당하는 gene을 없애고 대신에 유용한 유전자를 삽입한다고 설명하셨는데, 융용한 유전자를 삽입하더라도 식물체에서 구체적으로 무엇을 얻을 수 있는지 궁금합니다. 다시 말씀드리면 식물체에서 얻을 수 있는 단백질은 한정되어 있을텐데요? 만약 유용한 단백질이 애초에 식물체에서 생산되는 것이라면 Enhancer를 써도 되지 않은지요?

설명:
1) Op-Au 부분을 제거하고 이 부분에 GUS 유전자를 첨가하여 T-DNA tagging에 이용할 수 있습니다.
2) 식물체에서도 인슐린을 생산할 수 있으며, 관련 유전자를 이 부분에 포함하여 사용하면 됩니다. 일본에서 성공하였으며, 또한 Golden rice 같은 경우는 비타민 합성유전자를 첨가하여 비타민이 증가된 경우도 있습니다.모두는 아니라도 상당히 많은 동물의 유전자를 식물에서 만들 수 있습니다.
3) 원하는 유전자가 원래 식물에 있다해도 정확히 해당유전자 부근에 enhancer를 첨가하기는 어렵습니다( random insertion 때문). 따라서 식물유전자를 분리하여 강한 promoter 뒤에 연결한 유용한 구조를 만들어서 직접 형질전환하여 이용하는 것이 효과적입니다.

2. Promoter trap에서 Gus와 Ter를 같이 사용하는데 Ter 떄문에 그 뒤에 어떤 기관을 담당하는 Gene은 발현이 안될텐데, 그것이 만약 뿌리라면 뿌리기관 형성에 장애가 될 것이고, GUS 가 뿌리에서 색깔을 나타내는데 그 뿌리라는 장소에 문제가 생겨 색깔이 나타나는데 방해가 되지 않나요?

설명: 가능합니다. 만약 뿌리가 완전히 없어지면 해당부분에서 색깔을 보기는 어렵지요. 그러나 이런 경우는 많지 않고 대개는 부분적인 결손이 일어납니다. 예로서 곁뿌리가 비정상적인 발달을 하는 등등.. 따라서 이 경우에는 발현은 나타날 것이고 관찰부위를 암시하는 중요한 힌트가 되지요.

그리고 장점에서 Gene function 이 파괴되는것이 Gus/TEr 떄문인지요? 그리고 왜 그것이 장점이 되나요?

설명: 관찰 장소를 대략적으로 알고 그 부분에서 결손을 찾아낼 수 있기 때문입니다. 따라서 발현장소와 그곳에서의 표현형을 모두 알면 가장 정확한 기능을 판정할 수 있습니다.

3. Ipcr에서 Self ligation 을 이용하여 Primer 제작 후 PCR을 하는것은 이해가 되는데 어떻게 PCR된 Dna의 시퀀스를 알 수 있는지 궁금합니다.(올리고 뉴클레오타이드를 순차적으로 넣는 것이라고 생각하지는 않는데요...)

설명: PCR된 DNA product는 분리 정제되어 곧바로 DNA sequencing 분석에 사용되며, 이를 통해서 염기서열을 알 수 있습니다. 즉, 한단계의 더 실험을 수행해야 알 수 있습니다.

4. Tail pcr에서 TR1, TR2, TR3로 순차적으로 Primer를 사용하는 장점이 알고 싶은 시퀀스 부분의 Dna Region의 PCR이 되어서 나올 확률을 높이기 위해 점점 짧게 들어가서 확률을 높인다는 개념이 맞는지요?

설명: 맞습니다. 가끔씩 가장 바깥쪽의 염기서열만이 일부 유사한 다른 유전자가 첫번째 PCR에서 증폭이 되어도, 다음단계에서 더 내부에 존재하는 염기서열이 다른 경우에는 2차, 3차 PCR에서 제거되게 되어, 결국에는 마지막에 전체 내부의 염기서열이 정확히 일치하는 것만 PCR이 최종적으로 되게 됩니다.

전종성